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020-86438890
品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | RC101 |
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規(guī)格 | 50rxn | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 細(xì)胞/ 組織總RNA 提取 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,食品,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
細(xì)胞/ 組織總RNA 提取試劑盒
FastPure® Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit
細(xì)胞/ 組織總RNA 提取試劑盒
純度高: 獲得的RNA純度高,可直接用于下游純度要求高的實(shí)驗(yàn)。
基因組殘留少: 配有基因組DNA吸附柱和DNase膜上消化模塊,可有效去除DNA污染。
簡單快速: 無需配備其他試劑、無需酚氯FANG抽提、常溫操作即可。
通用性強(qiáng): 適用于多種不同類型的細(xì)胞、組織RNA的提取。
分別使用Vazyme #RC101和T公司同類試劑提取2 × 106 個(gè)293T細(xì)胞總RNA,使用100 μl洗脫體積,取1 ul提取產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。從圖中可以看出,Vazyme #RC101提取RNA濃度高于T公司同類產(chǎn)品。
本試劑盒可從動(dòng)物細(xì)胞或組織中快速提取總RNA。試劑盒基于硅膠柱純化技術(shù),提取過程中無需使用有毒的酚/ 氯FANG抽提,全程僅需30 min。試劑盒中g(shù)DNA-Filter Columns能夠有效的分離上清和組織裂解物并吸附去除gDNA,另外,試劑盒中配有DNase膜上消化模塊,可有效去除DNA 污染;RNAPure Columns能高效的結(jié)合RNA,配以優(yōu)化后的Buffer溶液,使得到的總RNA純度高,無蛋白和其他雜質(zhì)污染,可用于RT-PCR、Real-time PCR、芯片分析等多種下游實(shí)驗(yàn)。
組分 | RC101-01 (50 rxn) |
Buffer RL1 | 30ml |
Buffer RL2 | 15ml |
Buffer RW1 | 60ml |
Buffer RW2 | 36ml |
RNase-free ddH2O | 10ml |
Buffer RDD | 6ml |
DNase I, RNase-free | 250 μl |
gDNA-Filter Columns (each in a 2 ml Collection Tube) | 50 個(gè) |
RNAPure Columns (each in a 2 ml Collection Tube) | 50 個(gè) |
RNase-free Collection Tubes 1.5 ml | 50個(gè) |
DNase I置于-20℃保存;
Buffer RL1在加入β-巰基乙醇后,可在4℃保存1個(gè)月;
其余組分均可在常溫(15-25℃)干燥條件下保存。
細(xì)胞/ 組織總RNA 提取試劑盒
Q1:RNA提取得率低。
A1:(1) 樣本保存不當(dāng)或者樣本保存時(shí)間過久。樣本保存不當(dāng)或者保存時(shí)間過長都有可能導(dǎo)致RNA的降解,采集新鮮樣本或經(jīng)過液氮速凍后保存于-70℃或液氮中的樣本。
(2) 勻漿或者液氮研磨不充分。勻漿或者液氮研磨不充分,裂解不充分,導(dǎo)致RNA的釋放不充分。
(3) 組織或者細(xì)胞中RNA含量偏低:不同細(xì)胞和組織中 RNA 的豐度不同,需做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定合適的樣品起始量。
(4) 組織起始量太少或者太多:樣品量過少,則細(xì)胞組織中RNA含量較低;樣品量過多則可能超過裂解液的裂解能力,裂解將不*,從而導(dǎo)致RNA得率低或質(zhì)量下降。
(5) 洗脫不充分。RNase-free ddH2O滴加到純化柱膜中央。純化柱的洗脫體積為50-200 μl,若洗脫效果不理想,可以加入在65℃預(yù)熱的RNase-free ddH2O后,延長室溫放置時(shí)間,離心后進(jìn)行第二次洗脫。
Q2:gDNA-Filter Columns堵塞問題。
A2:(1) 樣品用量太多。本試劑盒適用于提取10-20 mg動(dòng)物組織或者2-5×106個(gè)細(xì)胞,超量的組織會(huì)降低產(chǎn)量以及純度,操作時(shí)應(yīng)減少樣本使用量。
(2) 樣品富含肌纖維。肌肉、心臟以及皮膚等富含肌纖維,肌纖維的分子量大,會(huì)引起柱子堵塞,樣本處理時(shí)采用液氮研磨方式會(huì)降低堵柱現(xiàn)象。
(3) 組織研磨或者勻漿不充分。研磨或者勻漿不充分時(shí),碎片有可能導(dǎo)致柱堵塞,將裂解后的液體先進(jìn)行 13,000×g 離心5 min,取上清再加入gDNA-Filter Columns。
Q3:RNA降解。
A3:純化后的RNA降解與樣本質(zhì)量、是否被RNase污染、操作方式等因素有關(guān):
(1) 樣本因?yàn)闆]有及時(shí)保存,導(dǎo)致RNA降解。組織樣本或者細(xì)胞在收集后若不及時(shí)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),液氮速凍后于-80℃保存。
(2) 樣本反復(fù)凍融。組織樣本保存時(shí),分小塊保存,避免因反復(fù)凍融導(dǎo)致樣本降解。
(3) 電泳原因。常見的RNA降解現(xiàn)象部分因?yàn)殡娪具^程引起的,電泳前將電泳槽用3%雙氧水浸泡20 min,之后用RNase-free ddH2O進(jìn)行沖洗,電泳緩沖液用RNase-free ddH2O配置。
(4) 確保提取過程中使用的槍頭和離心管均為RNase-free。
Q4:提取的RNA有基因組DNA污染。
A4:不同種類組織細(xì)胞DNA、RNA含量相差很大,請(qǐng)勿超過20 mg組織和5×106細(xì)胞。如肝臟、脾臟和腎臟DNA含量豐富,請(qǐng)勿超過10 mg,否則會(huì)導(dǎo)致基因組殘留過多。gDNA-Filter Columns能夠有效去除體系中大部分DNA,如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì)微量DNA十分敏感,可根據(jù)具體情況選擇選擇使用以下方案:
(1) 使用試劑盒提供的DNase I進(jìn)行膜上消化清除DNA污染。
(2) 設(shè)計(jì)引物時(shí)選用跨內(nèi)含子的引物,從而避免基因組DNA模板參與擴(kuò)增反應(yīng)。
(3) 逆轉(zhuǎn)錄時(shí)選擇含有基因組去除模塊的逆轉(zhuǎn)錄試劑。
上一產(chǎn)品:R401傳統(tǒng)總RNA提取試劑盒
下一產(chǎn)品:DE103Lysozyme溶菌酶
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