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技術 | 還在 2D 細胞培養(yǎng)?Out 了,3D 培 養(yǎng)玩起來!
作者:燕子
你的細胞是養(yǎng)在哪兒呀?......不就是塑料的細胞培養(yǎng)皿中嗎?圓的,方的,長的隨你選俺都 有!
那你的組織實驗和細胞實驗結果都能一致嗎?嗯嗯,大部分還是能的,那另一部分呢?我也 不知道嘞!做了好多遍的!
其實呢,我們在細胞水平的研究大部分呢還是在 2D 水平的,然而細胞在體內生活的環(huán)境遠 遠復雜的多。3D 細胞培養(yǎng)相比 2D,優(yōu)勢就很明顯,更接近細胞的體內狀態(tài),能夠提高細胞因 子、抗體和其他分子的產量,測試劑盒已經到了 ρg 級細胞因子測不到心酸再也不會有了! 在 3D 體系內干細胞能夠有效的分化,基因表達、細胞活動與體內過程更接近。
建立 3D 細胞體系,聽上去很復雜的樣子;現(xiàn)在就用模擬肺環(huán)境為例,介紹一下肺部 3D 體 系建立。
Immunocompetent 3D Model of Human Upper Airway for Disease Modeling and In Vitro
Drug Evaluation
建立上皮細胞&纖維原細胞共培養(yǎng)體系
ES 支架切割成 2cm2 每小塊,放置距離紫外光源 8cm 處滅菌 15min,每一面都需要這樣操作
滅菌哦。切割好的支架移入 12 孔板中(無菌操作),將一個鋼圈放置在支架上,加抗生素再 進一步滅菌,放入恒溫孵箱過夜。吸去抗生素,用 PBS 清洗,后加細胞培養(yǎng)液浸沒支架。在 支架支撐物里上皮細胞支架放在纖維原單層細胞支架上形成 2D 共培養(yǎng)模型。
圖:鋼圈圈定細胞接種的面積;支架支撐物放在 2D 氣-液界面(白色圓柱)里,支架在類 似肺組織在適當?shù)臈l件(ECM)下培養(yǎng)(上皮細胞在上層和成纖維細胞浸沒),模仿體外肺 組織環(huán)境。以防在培養(yǎng)過程中下?lián)芊蛛x或移動,支架固定在*的支撐物上。細胞在培養(yǎng) 基(目標細胞所用培養(yǎng)基)中孵育。
建立上皮&樹突&纖維原細胞 3D 共培養(yǎng)
上皮細胞&纖維原細胞共培養(yǎng)體系在孵箱中孵育 14 天后插入樹突細胞支架,培養(yǎng)基仍為混 合培養(yǎng)基。上皮&樹突&纖維細胞 3D 體系培養(yǎng) 14 天,使其形成更似生理環(huán)境的細胞間聯(lián)系。
接下來你想研究肺部哪個病,哪個藥,哪種細胞就放進去相互作用吧!
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